Les échafaudages 3D en chitosane (CHI), fibroïne (SF) et hydroxyapatite (HA) sont biocompatibles et intéressants pour des applications dans l'ingénierie tissulaire osseuse. L'objectif était donc de préparer, caractériser et évaluer le comportement in vitro des échafaudages 3D en CHI, CHI/SF, CHI/SF/HA. Les biomatériaux ont été produits à partir d'une solution de CHI, CHI/SF et CHI/SF/HA dans de l'acide acétique et, après les processus de production, ils ont été soumis à des tests in vitro avec des cellules SaOS-2 pendant 7, 14 et 21 jours. Les échafaudages ont été caractérisés par diffraction des rayons X, spectroscopie infrarouge à transformée de Fourier avec réflectance totale atténuée, analyse thermogravimétrique, calorimétrie différentielle exploratoire, microscopie électronique à balayage, spectroscopie à énergie dispersive, et soumis à des tests pour vérifier la porosité, la taille des pores et l'angle de contact. La viabilité et l'activité cellulaire ont été évaluées par réduction du MTT et par détection de l'activité de la phosphatase alcaline. Les échafaudages 3D ont été considérés comme non toxiques et capables de favoriser l'adhésion, la prolifération et la différenciation cellulaires, et peuvent être utilisés dans le traitement de la réparation des défauts osseux.